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免疫細胞轉染時相關事項要了解！
發布時間： 2021-10-06 點擊次數： 1540次常規免疫細胞轉染技術可分為兩大類：一類是瞬時轉染，一類是穩定轉染。前者外源DNA/RNA不整合到宿主染色體中，因此一個宿主細胞中可存在多個拷貝數，產生高水平的表達，但通常只持續幾天，多用于啟動子和其它調控元件的分析。一般來說，超螺旋質粒DNA轉染效率較高，在轉染后24-72小時內分析結果，常常用到一些報告系統如熒光蛋白，β半乳糖苷酶等來幫助檢測；后者也稱穩定轉染，外源DNA既可以整合到宿主染色體中，也可能作為一種游離體存在。盡管線性DNA比超螺旋DNA轉入量低但整合率高。外源DNA整合到染色體中概率很小，大約1/104轉染細胞能整合，通常需要通過一些選擇性標記，如來氨丙基轉移酶（APH），潮霉素B磷酸轉移酶（HPH），胸苷激酶（TK）等反復篩選，得到穩定轉染的同源細胞系。免疫細胞轉染時的相關事項：1.細胞密度一般來說，當細胞密度達到60%-80%時進行轉染可以取得較高的轉染效率，過低或過高都會影響轉染效果。2.細胞狀態這點非常關鍵，很多時候傳代次數太少或者太多都將導致細胞對轉染試劑敏感度的改變。因此，為了提高轉染效率以及轉染穩定性、降低細胞毒性，應盡量使用適度傳代的細胞系，并在不同次實驗時保持細胞傳代次數的一致性。盡量選擇無支原體污染的細胞，支原體污染是肉眼看不到的，可用支原體檢測試劑盒進行檢測，確保無支原體污染。3.細胞種類不同細胞種類的細胞在做轉染時所需要的轉染體系是不同的，不能一種體系用在所有類型細胞的轉染實驗。4.DNA純度在制備高純度DNA時，還需要對DNA進行內毒素的去除，內毒素的存在會造成細胞毒性，嚴重影響轉染效率，現在市面上有很多去除內毒素的DNA純化試劑盒可供選擇。5.轉染試劑脂質體試劑的毒性大，盡量選用脂質體的轉染試劑。另外，在大規模使用前，需進行轉染試劑和核酸優比例的摸索。- 下一篇：無血清凍存液的一般凍存步驟分享
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